原果膠含量試劑盒說(shuō)明書

                                            微量法100T/48S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用，在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。

測(cè)定原理：

原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物，在530 nm處有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

天平、研缽、常溫離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體100mL×2瓶，4℃保存。

提取液二：液體100mL×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，4℃保存。

試劑一：濃硫酸，自備。

試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。

試劑三：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

將組織樣品搗碎，按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(mL)為1: 20的比列（建議取約0.05g樣品，加入1mL提取液一），置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，取出冷卻后于5000g、 25℃離心10min，去掉上清，沉淀中再加入1mL提取液一重復(fù)操作一次，離心后去上清，沉淀中加入1mL提取液二，置于90℃恒溫水浴鍋中水解1h，取出冷卻后于8000g、25℃離心15min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定操作表：

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式：

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) = 0.25×△A2÷△A1÷W

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/mL；V標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL； V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g。

b.       用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) =0.25×△A2÷△A1÷W

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/mL；V標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL； V樣總：加入提取液體積，1mL； W：樣本鮮重，g。

注意事項(xiàng)：

1.        濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，90℃加熱取出后冷卻再打開(kāi)蓋子，以防液體飛濺燒傷。                                    

2.        若吸光值超過(guò)1，可將樣本提取液進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3.        Z低檢出限為10μg/g。

原果膠含量試劑盒僅供科研！